Petriho miska s agarem: jak pěstovat kultury hub
Přemýšleli jste někdy, jak se pěstují a uchovávají živé kultury hub? Odpovědí je Petriho miska s agarem. Práce s agarem umožňuje mykologům i hobby pěstitelům uchovávat, čistit a množit své oblíbené kmeny. V tomto návodu vás provedeme od spor nebo tkáně až ke zdravé, čisté kultuře. Ukážeme vám také, jak ji udržet zdravou celé měsíce.
Co je Petriho miska s agarem?
Agar je želatinová látka z mořských řas. Když ho smícháte s živinami, jako je sladový extrakt a kvasnice, vytvoří pevný a výživný povrch. Mycelium, vegetativní část houby, na něm dobře roste. Protože na misce vidíte každý kousek růstu, snadno odhalíte kontaminaci. Díky tomu můžete vybrat to nejsilnější a nejčistší mycelium. Misky si můžete nalévat sami, ale potřebujete k tomu tlakový hrnec a čisté pracoviště. Naše hotové Petriho misky se sladovo-kvasnicovým agarem se nalévají ve sterilních podmínkách, takže můžete začít hned.
Krok 1: začněte sporami nebo tkání
Postup začíná sporami nebo malým vzorkem tkáně ze zralé houby. Ty pak opatrně přenesete na sterilní povrch – k tomu slouží Petriho miska s agarem.
- Spory: nejlépe klíčí na misce chudé na živiny. Naše misky s agarem pro spory mají lehký sladovo-kvasnicový recept vyvinutý pro klíčení.
- Tkáň (klonování): malý kousek z vnitřku zdravé houby vám dá přesnou genetickou kopii této houby. Více se dočtete v našem návodu na zlepšení genetiky hub klonováním.
Krok 2: klíčení a primární izolace
Jakmile spory umístíte na agar, vyklíčí a začnou tvořit mycelium. Mycelium se časem rozroste po misce jako jemná síť bílých nebo barevných vláken. Této fázi se říká primární izolace. Během ní vybíráte části s nejsilnějším a nejzdravějším růstem. Tak můžete izolovat jedinečné kmeny nebo odrůdy. Po naočkování každou misku utěsněte Parafilmem: drží nečistoty venku a přitom umožní minimální výměnu plynů, kterou kultura potřebuje.
Krok 3: přeočkování, aby kultura zůstala čistá
Abyste udrželi živou kulturu, pravidelně přenášejte malý kousek mycelia na čerstvou agarovou misku. Tomuto postupu se říká přeočkování (subkultivace) a udržuje kulturu vitální a dlouhověkou. Mycelium berte vždy z nejčistšího, předního okraje růstu. Tak kontaminaci necháte za sebou a udržíte zdravý, čistý kmen. Pracujte ve stojícím vzduchu, nebo ideálně před laminárním boxem či filtrační jednotkou HEPA, a noste nitrilové rukavice, abyste snížili riziko kontaminace.
Krok 4: uchovávání živých kultur
Správné skladování je pro životnost živých kultur zásadní. Většina pěstitelů uchovává misky v lednici při zhruba 4–8 °C. Chlad zpomaluje mycelium. Díky tomu kultura vydrží mnohem déle. Každou misku navíc označte kmenem a datem, abyste mohli sledovat svou genetiku.
Petriho miska s agarem, pak zrno a tekutá kultura
Jakmile máte na agaru čistou kulturu, můžete přejít k dalšímu kroku: přeneste klínek mycelia na sterilizované zrno, nebo ho namnožte v předem sterilizované lahvičce na tekutou kulturu. Na agar ještě nejste připraveni? Naše hotové stříkačky s tekutou kulturou obsahují izolovanou genetiku, takže můžete přejít rovnou k očkování.
Závěr
Petriho miska s agarem je praktický způsob, jak uchovat oblíbené kmeny. Je to také cenný nástroj pro pokusy. S každým přenosem se o svých kulturách dozvíte víc. Zkrátka, práce s agarem je základní dovedností každého mykologa.
Ještě nemáte laminární box? Zjistěte, jak postavit a používat still air box pro čistou práci s agarem.
